샘플 목표

후성유전체는 수정 후 삭제된 후 후성유전적 표시가 다시 확립되는 출생 전 단계에서 환경적으로 유발된 변화에 가장 취약합니다[15, 16]. 제안된 연구에서는 배아 발달의 초기 단계와 후기 단계에서 고온 노출이 C. scorpioides의 님프 생존, 발달 시간, 성체 형태학적 및 생식 특성에 미치는 영향을 조사할 것입니다. ncRNA는 실험 개체의 고환 및 난소 조직에서 추출되고 이후 라이브러리 구축 및 RNA 시퀀싱을 위해 냉동됩니다. 이 프로젝트의 목적은 열대 외온동물이 기후 온난화에 가장 취약한 생활사 단계에 대한 이해를 높이는 것입니다.

이 연구는 배아 발달 중 고온에 노출되면 이 신열대 가성전갈에 부정적인 영향을 미친다는 가설을 테스트할 것입니다. 후생적 재프로그래밍은 수정 직후에 발생하므로, 배아 발달 후반에 노출되는 개체에 비해 초기 단계 배아로서 고온을 경험하는 개체에서 온도 상승의 해로운 영향이 더 심각할 것으로 예측됩니다. 또한 초기 배아 노출은 늦은 노출보다 작은 ncRNA 발현 프로필에 더 큰 혼란을 일으킬 것으로 예측됩니다.

배아 발달 중 온도 변화. 짝짓기는 블록당 27쌍의 관련 없는 수컷과 암컷이 있는 3개의 블록에서 수행됩니다. 암컷은 하루에 3가지 온도 변화 치료 중 하나에 무작위로 배정됩니다: 조기 노출(E) 치료; 후기 노출(L) 처리 및 대조(C) 처리. C 처리된 암컷은 C. scorpioides 자연 서식지의 평균 현재 온도인 27.3°C의 평균 온도로 프로그램된 인큐베이터에서 임신 기간 내내 유지됩니다. E 처리에서 암컷은 배아 1~5일(E1~5) 동안 평균 온도 29.3°C(+ 2°C)로 프로그래밍된 동일한 인큐베이터로 옮겨진 다음 대조 인큐베이터로 돌아갑니다. L 암컷은 E5까지 제어 온도에서 유지되고 E6 - 10에서는 더 높은 온도의 인큐베이터로 전환됩니다. 배아 발달 5일차에 모든 임신한 암컷의 새끼 주머니가 고배율로 촬영되며, 배아가 계산되었습니다. 암컷의 생식 상태를 모니터링하고, 자연 유산 사례를 기록하며, 생존을 기록하기 위해 성공적으로 새끼를 낳은 암컷에게서 태어난 원충(1단계 약충)의 수를 계산합니다.

님프를 성인이 될 때까지 양육합니다. 각 암컷의 20개 원충 하위 집합은 제어 온도의 개별 바이알에서 성체 단계로 사육됩니다. 출생부터 성년까지의 발달 시간을 기록하고, 생후 60일 이내에 성충을 생산하지 않는 바이알의 경우 약충이 생존하지 못한 것으로 점수를 매깁니다.

성인 특성. 형태적 특성에 대한 온도 영향을 평가하기 위해 E, L 및 C 처리의 수컷 및 암컷 성체 자손을 고배율로 촬영하고 발바닥(피식자 포획 및 수컷 전투에 사용되는 부속기관) 및 두흉부의 5가지 특성을 측정합니다. 생식 특성에 대한 영향을 확인하기 위해 세 가지 치료법의 수컷 자손을 비실험 암컷과 교배시키고 정자 패킷을 수집하여 정자의 수와 생존 가능성을 정량화합니다. 각 처리에서 나온 암컷 자손은 비실험 수컷과 교배됩니다. 암컷이 생산하는 초기 단계 배아의 수는 생식력의 척도를 제공하며, 생식 성공은 태어난 님프의 수를 세어 정량화됩니다.